ISO 21149

A norma ISO 21149, que inclui métodos de teste para a contagem e detecção de bactérias mesófilas aeróbicas em produtos cosméticos, dá duas diretrizes diferentes:

- pela contagem de colônias em meio de ágar após incubação aeróbica ou
- verificando a ausência de crescimento bacteriano após o enriquecimento. por

Método geral sob o padrão ISO 21149; Envolve a contagem de colônias com base na presença ou ausência de crescimento bacteriano em meio de ágar não seletivo ou após enriquecimento.

A possível inibição do crescimento microbiano pela amostra deve ser neutralizada para permitir a detecção de microrganismos viáveis. Em qualquer caso e qualquer que seja a metodologia, a neutralização das propriedades antimicrobianas do produto deve ser verificada e confirmada.

Outro método é a “Contagem de placas”
A contagem de placas consiste nas seguintes etapas:
⎯ Preparação de placas derramadas ou esfregaços usando uma cultura específica meio e Inoculação das placas utilizando uma quantidade definida de suspensão inicial ou diluição do produto.
⎯ Incubação aeróbica das placas a 32,5 °C ± 2,5 °C por 72 horas ± 6 horas.
⎯ Número de colônias unidades formadoras (CFU) contagem e cálculo do número de bactérias aeróbias mesófilas por mililitro ou grama de produto.

Terceiro método “Filtração por membrana”
A filtração por membrana consiste nas seguintes etapas:
⎯ Adicione uma quantidade apropriada da amostra validada a uma pequena quantidade de diluente estéril adequado. no aparelho de filtração umedecido com água, escorra imediatamente e lave de acordo com o procedimento validado (ver 13.3.4). Transfira o filtro de membrana para a superfície do meio de ágar especificado conforme especificado na ISO 21148.
⎯ Incubação aeróbica de membranas a 32,5 °C ± 2,5 °C por 72 horas ± 6 horas.
⎯ Unidades formadoras de colônias Contagem do número de CFUs e cálculo do número de bactérias mesófilas aeróbias por mililitro ou grama de produto.

O quarto método é “Detecção de bactérias por enriquecimento”
A determinação de bactérias por enriquecimento consiste nas seguintes etapas:
⎯ 32,5 °C ± 2.5 Incubação de uma quantidade definida de suspensão inicial por pelo menos 20 horas a °C em um meio líquido não seletivo contendo neutralizadores e/ou agentes dispersantes adequados.
⎯ Transferência de uma quantidade especificada da suspensão anterior para não meio de ágar sólido seletivo.
⎯ Incubação aeróbica por 48 horas a 72 horas a 32,5 °C ± 2,5 °C.
⎯ Detecção de crescimento de bactérias mesófilas aeróbias por amostra S do produto e expressando resultados como "presença /ausência".