ISO 21149

Kozmetik ürünlerde aerobik mezofilik bakterilerin sayımı ve tespiti için gerçekleştirilen test yöntemlerini içereren ISO 21149 standardı, iki farklı yönerge verir:

- aerobik inkübasyondan sonra agar besiyerindeki kolonileri sayarak veya
- zenginleştirmeden sonra bakteri üremesinin olmadığını kontrol ederek

ISO 21149 standardı kapsamındaki genel yöntem; seçici olmayan bir agar ortamında veya zenginleştirmeden sonra bakteri üremesinin varlığına veya yokluğuna göre kolonilerin sayılmasını içermektedir.

Numune tarafından mikrobiyal büyümenin olası inhibisyonu, canlı mikroorganizmanın saptanmasına izin verecek şekilde nötralize edilmelidir. Her durumda ve metodoloji ne olursa olsun, ürünün antimikrobiyal özelliklerinin nötralizasyonu kontrol edilmeli ve onaylanmalıdır.

Diğer bir yöntem de “Plaka Sayımı”
Plaka sayımı aşağıdaki adımlardan oluşmakta:
⎯ Belirli bir kültür ortamı kullanılarak dökülen plakaların veya yayma plakaların hazırlanması ve ürünün tanımlanmış miktarda başlangıç süspansiyonu veya seyreltmesi kullanılarak plakaların aşılanması.
⎯ Plakaların 32,5 °C ± 2,5 °C'de 72 saat ± 6 saat aerobik inkübasyonu.
⎯ Koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayısının sayılması ve mililitre veya ürün gramı başına aerobik mezofilik bakteri sayısının hesaplanması.

Üçünçü yöntem “Membran Filtrasyonu”
Membran filtrasyonu aşağıdaki adımlardan oluşmakta:
⎯ Doğrulanmış şekilde hazırlanan numunenin uygun bir miktarını, az miktarda uygun bir steril seyreltici ile ıslatılmış filtrasyon aparatına aktarın, hemen süzün ve doğrulanmış prosedüre göre yıkayın (bkz. 13.3.4). Membran filtreyi, ISO 21148'de belirtilen şekilde belirtilen agar ortamının yüzeyine aktarın.
⎯ Membranların 32,5 °C ± 2,5 °C'de 72 saat ± 6 saat aerobik inkübasyonu.
⎯ Koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayısının sayılması ve mililitre veya ürün gramı başına aerobik mezofilik bakteri sayısının hesaplanması.

Dördüncü yöntem ise “Zenginleştirme Yoluyla Bakteri Tespiti”
Zenginleştirme yoluyla bakteri tespiti aşağıdaki adımlardan oluşmakta:
⎯ 32,5 °C ± 2,5 °C'de, uygun nötrleştiriciler ve/veya dispersiyon ajanları içeren seçici olmayan bir sıvı ortamda, tanımlanmış bir miktarda başlangıç süspansiyonunun en az 20 saat inkübasyonu.
⎯ Önceki süspansiyonun belirli bir miktarının seçici olmayan katı agar besiyerine aktarılması.
⎯ 32,5 °C ± 2,5 °C'de 48 saat ila 72 saat arası aerobik inkübasyon.
⎯ Ürünün S numunesi başına aerobik mezofilik bakterilerin büyümesinin saptanması ve sonuçların "varlığı/yokluğu" şeklinde ifade edilmesi.