ISO 21149

La norma ISO 21149, que incluye métodos de ensayo para la enumeración y detección de bacterias aerobias mesófilas en productos cosméticos, da dos pautas diferentes:

- mediante el recuento de colonias en medio de agar después de la incubación aerobia o
- comprobar la ausencia de crecimiento bacteriano después del enriquecimiento. por

Método general bajo norma ISO 21149; Implica el recuento de colonias en función de la presencia o ausencia de crecimiento bacteriano en un medio de agar no selectivo o después del enriquecimiento.

La posible inhibición del crecimiento microbiano por parte de la muestra debe neutralizarse para permitir la detección de microorganismos viables. En cualquier caso y cualquiera que sea la metodología, se debe comprobar y confirmar la neutralización de las propiedades antimicrobianas del producto.

Otro método es el "recuento de placas"
El recuento de placas consta de los siguientes pasos:
⎯ Preparación de placas vertidas o placas de frotis usando un cultivo específico medio e Inoculación de las placas utilizando una cantidad definida de suspensión inicial o dilución del producto.
⎯ Incubación aeróbica de las placas a 32,5 °C ± 2,5 °C durante 72 horas ± 6 horas.
⎯ Número de colonias unidades formadoras de unidades (UFC) contando y calculando el número de bacterias aerobias mesófilas por mililitro o gramo de producto.

Tercer método "Filtración por membrana"
La filtración por membrana consta de los siguientes pasos:
⎯ Agregue una cantidad adecuada de la muestra validada a una pequeña cantidad de diluyente estéril adecuado. en el aparato de filtración humedecido con agua, escurrir inmediatamente y lavar según el procedimiento validado (ver 13.3.4). Transfiera el filtro de membrana a la superficie del medio de agar especificado como se especifica en ISO 21148.
⎯ Incubación aeróbica de membranas a 32,5 °C ± 2,5 °C durante 72 horas ± 6 horas.
⎯ Unidades formadoras de colonias Contar el número de UFC y calcular el número de bacterias aerobias mesófilas por mililitro o gramo de producto.

El cuarto método es la “Detección de bacterias por enriquecimiento”
La determinación de bacterias por enriquecimiento consta de los siguientes pasos:
⎯ 32,5 °C ± 2.5 Incubación de una cantidad definida de suspensión inicial durante al menos 20 horas a °C en un medio líquido no selectivo que contenga neutralizadores y/o agentes dispersantes adecuados.
⎯ Transferencia de una cantidad específica de la suspensión anterior a medio de agar sólido selectivo.
⎯ Incubación aeróbica durante 48 horas a 72 horas a 32,5 °C ± 2,5 °C.
⎯ Detección de crecimiento de bacterias aerobias mesófilas por S muestra de producto y expresando los resultados como "presencia /ausencia".